确保大客车在运营中严格遵守乘载规定，需要从客运企业、驾驶员、监管部门、乘客等多方面共同努力，具体措施如下：

客运企业层面

加强内部管理：建立完善的车辆运营管理制度，明确规定严禁超员超载等违规行为及相应的处罚措施。严格管控挂靠车辆，不能只收费不管理，在日常安全监督管理上，要严于自营车辆。

强化车辆技术管理：定期对大客车进行维护和检查，确保车辆的座椅、安全带等设施完好，发现问题及时修复或更换。同时，利用技术手段，如安装核载人数检测设备，当车内人数接近或超过核载人数时发出警报。

落实动态监控措施：通过安装GPS定位系统、视频监控等设备，对车辆的运行状态进行实时监控。安排专人负责监控平台的值守，及时发现并制止超员等违规行为。

做好驾驶员管理与培训：招聘具备良好驾驶记录和职业素养的驾驶员，定期组织驾驶员参加安全培训和教育活动，提高驾驶员对乘载规定重要性的认识，以及应对超员等问题的处理能力。

驾驶员层面

提高安全意识：深刻认识到超员行为的危害，自觉遵守交通法规和企业的运营规定，将乘客的生命安全放在首位。

严格执行规定：在每次发车前，认真核对乘客人数，确保不超过核定载客人数。对于乘客的违规行为，如强行要求超员乘车等，要坚决予以拒绝和制止。

做好车辆检查：在出车前、行车中、收车后，对车辆进行全面检查，确保车辆安全设施正常，如发现安全带损坏、座椅缺失等影响乘载规定的问题，及时报告并修复。

监管部门层面

加强执法检查：加大路面执法力度，采取定点检查与流动巡逻相结合的方式，对大客车进行严格检查，严查超员、超速、疲劳驾驶等违法行为。

建立联合监管机制：交通、公安等部门建立联合监管机制，加强信息共享和协作配合，共同对大客车运营进行监管。对违规企业和驾驶员进行联合惩戒，提高违法成本。

强化源头监管：深入客运企业，检查企业的安全管理制度落实情况、车辆技术状况、驾驶员资质等，督促企业严格遵守乘载规定，从源头上消除安全隐患。

乘客层面

增强安全意识：主动了解乘坐大客车的安全知识，认识到超员乘车的危险性，自觉抵制超员车辆。

积极监督举报：发现大客车有超员等违规行为，及时向交通管理部门或相关监管机构举报，共同维护道路交通安全。